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分子伴侣介导的自噬研究工具
分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)主要通过分子伴侣识别蛋白质序列上的一段特殊基序,将蛋白转运到溶酶体内进行降解的过程。CMA可以降解受损或变异的蛋白质,对于维持细胞内蛋白质的稳态具有重要作用;也可以降解脂质和葡萄糖代谢、细胞周期、DNA 修复等过程中的关键蛋白而发挥调节作用。通常情况下,肝脏、肾脏、大脑等组织或培养物中几乎所有不同细胞类型中均可以检测到一定程度的CMA活性,而细胞应激状态下则最大程度地激活了这一途径,饥饿、氧化剂、促氧化剂和蛋白质变性毒素等均会引起CMA的活化。CMA通过选择性识别和降解细胞过程中的某些蛋白,对细胞活动做到精确调控,逐渐成为自噬研究的热点内容。另外CMA与代谢紊乱、神经变性、免疫缺陷、糖尿病及癌症等重大疾病也有很大的相关性,高效的CMA活性监测工具可为其在疾病中的潜在功能研究提供极大的便利。
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KFERQ-PAmCherry1 检测CMA活性 慢病毒、腺病毒、腺相关病毒
PAmCherry1-KFERQ-NE
分子伴侣介导的自噬研究工具

KFERQ-PAmCherry1和PAmCherry1-KFERQ-NE病毒工具:

PAmCherry1是一种光活化蛋白,本身无光,需在405nm波长的光暴露5-10分钟进行活化后,才可被激活发出红色荧光(激发564nm,发射595nm)。使用这类荧光蛋白可降低高自发荧光或累积自发荧光色素沉积物对细胞观察的影响。KFERQ-PAmCherry1借助分子伴侣所识别底物基序KFERQ与光活化蛋白PAmCherry1融合,使其转化为CMA底物,当靶向溶酶体时便可通过观察红色荧光斑点数量来检测活细胞中的CMA活性。

注:“NE”是蛋白标签,可用于蛋白表达检测。


PMID: 21750540(KFERQ-PAmCherry1工具)


PMID: 30983487(PAmCherry1-KFERQ-NE工具)



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