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腺相关病毒(AAV)包装

Adeno-Associated Virus
腺相关病毒(Adeno-Associated Viral Vector,AAV)属于微小病毒科( parvovirus),为无包膜的单链线状 DNA 病毒。AAV 的基因组约 4700bp,包括上下游两个开放读码框架(ORF),位于分别由 145 个核苷酸组成的 2 个反向末端重复序列(ITR)之间。 由于腺相关病毒具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优点,已被广泛地应用于基础研究和临床试验中,并且腺相关病毒载体已成为世界上最常用的基因治疗载体之一。
腺相关病毒有如下特点:
安全
AAV不参与任何疾病的发生,已经用于临床疾病的治疗。
表达周期久
AAV免疫原性低,基因可持续表达半年以上。
动物水平感染
AAV滴度高达1013vg/ml以上,在体组织感染能力强。
腺相关病毒产品与服务
服务类型提供产品 滴度 适用范围
常规基因过表达/干扰
CRISPR/Cas9 AAV
circRNA/LncRNA/miRNA过表达和干扰定制
光遗传、化学遗传、钙指示剂、跨血脑屏障AAV、逆行示踪AAV
组织特异性DIO AAV、Cre重组酶
常规启动子/血清型AAV 1012v.g/ml或1013v.g/ml 适用于大部分组织感染

特异性启动子/血清型AAV 1012v.g/ml或1013v.g/ml 适用于特定的靶器官/组织感染,特异性强
服务流程
腺相关病毒包装服务流程



质量标准
检测项目 检测方法 检测结果
支原体 PCR 阴性
内毒素 LAL 合格
细菌 培养法 阴性
真菌 培养法 阴性
活性滴度 qPCR ≥10^12 v.g/ml
载体选择(常用)
编号 调控方式 元件顺序 原核抗性 荧光标记 启动子
AAV001 过表达 pHBAAV-CMV-MCS-3flag-T2A-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CMV
AAV003 过表达 pHBAAV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CMV
AAV004 过表达 pHBAAV-CAG-MCS-T2A-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CAG
AAV006 过表达 pHBAAV-CAG-MCS-T2A-mCherry Ampicillin mCherry CAG
AAV026 过表达 pHBAAV-CMV-MCS-T2A-mCherry Ampicillin mCherry CMV
AAV071 过表达 pHBAAV-CMV-MCS-3flag Ampicillin CMV
AAV123 过表达 pHBAAV-CMV-MCS-P2A-Luc2 Ampicillin Luciferase CMV
AAV007 过表达cre诱导 pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CAG
AAV008 过表达cre诱导 pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-mCherry Ampicillin mCherry CAG
AAV027 过表达cre诱导 pHBAAV-CMV-DIO-MCS Ampicillin CMV
AAV028 过表达cre诱导 pHBAAV-CMV-DIO-MCS-T2Am-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CMV
AAV030 过表达cre诱导 pHBAAV-CAG-DIO-MCS Ampicillin CAG
AAV020 干扰 pHBAAV-U6-MCS-CMV-mCherry Ampicillin mCherry U6
AAV021 干扰 pHBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP Ampicillin EGFP U6
AAV036 干扰 pHBAAV-U6-MCS-CMV-ZsGreen Ampicillin ZsGreen U6
AAV074 干扰 pHBAAV-U6-MCS-CMV-eRFP Ampicillin eRFP U6
AAV121 干扰 pHBAAV-U6-MCS Ampicillin U6
AAV122 干扰 pHBAAV-U6-MCS-CMV-Luc Ampicillin Luciferase U6
AAV023 Cas9/gRNA pHBAAV-CMV-Sacas9-U6-gRNA Ampicillin U6
汉恒AAV血清型推荐
感染部位 推荐血清型
心脏 AAV9
肝脏 AAV8/AAV9
全脑(跨血脑屏障) AAV-BBB
大脑(局部) AAV9/AAV2/AAV5
逆行示踪 AAV-Retro
脊髓 AAV5/AAV1/AAV9
脂肪 AAV9
骨骼肌 AAV9
眼睛 AAV2/AAV-DJ
肺脏 AAV6
肾脏 AAV2/AAV9
肠道 AAV1/AAV5
血管(内皮为主) AAV1/AAV5
胰腺 AAV8
特异性启动子
<
组织 启动子名称 启动子特性
神经 hSyn 神经元特异性启动子
mecp2 较短的神经元特异性启动子
c-fos 兴奋神经元启动子
CaMKllα 前脑谷氨酸能神经元特异性启动子
Nms 神经前体细胞特异性启动子
TUBA1A (Tα1) 早期神经元特异性启动子
hVGAT GABA能神经元/中间神经元特异性启动子
TH 多巴胺神经元特异性表达启动子
gfaABC1D (minimal GFAP) 星形胶质细胞特异性启动子
CD68 活化状态的小胶质细胞特异性启动子
ibal 活化和静息状态的小胶质细胞特异性启动子
TMEM119 小胶质细胞特异性启动子
CNP (NPPC) 少突胶质细胞或施万细胞特异性启动子
MBP 少突胶质细胞特异性启动子
PLP 少突胶质细胞特异性启动子
Pdgfra 少突胶质前体细胞特异性启动子
NG2 少突胶质前体细胞特异性启动子
Pirt 感觉神经元特异性启动子
ALDH1L1 丘脑星形胶质细胞特异性启动子
心脏 cTNT 心肌细胞特异性启动子
POSTN 心肌成纤维细胞特异性启动子
TCF21 心肌成纤维细胞特异性启动子
肌肉 MHCK7 肌肉特异性启动子
SM22a 平滑肌特异性启动子
MHCK7 肌肉特异性启动子
ACTA1 (synthesized Spc5-12) 肌细胞特异性启动子
MYOG
心肌成纤维细胞特异性启动子
SP-C (SFTPC) 肺上皮细胞特异性启动子
肝脏 TBG 肝脏特异性启动子
肾脏 nphs1 肾脏足细胞特异性启动子
nphs 肾脏足细胞特异性启动子
Ksp-cadherin 肾小管上皮细胞特异性启动子
胰腺 padx1(pdx1) 胰腺特异性启动子
Insulin2 胰腺特异性启动子
脂肪 FABP4 (aP2) 脂肪细胞特异性启动子
adiponectin 脂肪细胞特异性启动子
UCP1 棕色脂肪细胞特异性启动子
Myf5 前体脂肪细胞特异性启动子
内皮 TIE 内皮细胞特异性启动子
视网膜 rpe65 视网膜特异性启动子
Arr3 视网膜视锥细胞特异性启动子
hrk视网膜视锥细胞和视杆细胞特异性启动子
前列腺 DD3 前列腺癌细胞特异性启动子
皮肤 Keratin14(K14) 皮肤表皮细胞特异性启动子
K14 角蛋白启动子
巨噬细胞 F4/80 巨噬细胞特异性启动子
COL2A1 软骨细胞特异性启动子
干细胞 Nanog 多功能干细胞启动子
汉恒特异性血清型AAV:
血清型名称 对应特异性细胞
AAV-shH10 视网膜穆勒细胞
AAV-Vec 内皮细胞
AAV-br1 脑血管内皮细胞
AAV-BI30 脑部血管内皮
AAV-eVEC 外周血管内皮
AAV-anc80L 视网膜/内耳
AAV-ie 内耳
AAV-BBB 穿过血脑屏障
AAV-GL 视网膜
AAV-NN 视网膜
AAV-capB10 脑部
AAV-BLS 膀胱
常见问题
腺相关病毒(AAV)是否可以用于感染细胞?

因其在快速分裂的细胞系中表达能力有限,一般不推荐使用腺相关病毒感染细胞。

部分血清型也可进行细胞感染,例如AAV-DJ。

不同的腺相关病毒(AAV)血清型的主要区别是什么?

几乎所有的AAV病毒骨架都是来源AAV2,不同血清型的差异在于包裹AAV遗传物质的蛋白外壳(Capsid),比如AAV5型,AAV8型和AAV9型,也可以分别标记为AAV2/5, AAV2/8, AAV2/9。其中2代表骨架来源于AAV2,血清型为5,8和9。

腺相关病毒(AAV)的包装容量一般多大?
腺相关病毒的包装容量(两个ITR之间的片段大小)通常不超过4.5kb,去除启动子、荧光标记、转录终止信号polyA等元件之外,外源基因的容量一般在2k左右。
AAV感染实例
腺相关病毒感染实例

客户发表文献节选
Moderate UV Exposure Enhances Learning and Memory by Promoting a Novel Glutamate Biosynthetic Pathway in the Brain
(杂志:CELL,IF=41.582,中国科学技术大学)
LECT2, a Ligand for Tie1, Plays a Crucial Role in Liver Fibrogenesis
(杂志:CELL,IF=41.582,南方医科大学)
Local hyperthermia therapy induces browning of white fat and treats obesity
(杂志:CELL,IF=41.582,华东师范大学)
Neuraminidase 1 is a driver of experimental cardiac hypertrophy
(杂志:European Heart Journal,IF=29.983,中国药科大学)
Targeting E3 Ubiquitin-Ligase WWP1 Prevents Cardiac Hypertrophy Through Destabilizing DVL2 via Inhibition of K27-Linked Ubiquitination
(杂志:CIRCULATION,IF=29.690,中国航天员空间医学基础与应用国家重点实验室)
N6-methyladenosine-modified TRAF1 promotes sunitinib resistance by regulating apoptosis and angiogenesis in a METTL14-dependent manner in renal cell carcinoma
(杂志:Molecular Cancer,IF=27.401,浙江大学附属邵逸夫医院)
Sja-miR-71a in Schistosome egg-derived extracellular vesicles suppresses liver fibrosis caused by schistosomiasis via targeting semaphorin 4D
(杂志:Journal of Extracellular Vesicles,IF=25.841,中山大学)
Transcriptional switch of hepatocytes initiates macrophage recruitment and T cell suppression in endotoxemia
(杂志:Journal of Hepatology,IF=25.083,中南大学湘雅三医院)
TRIB3 Interacts With β-Catenin and TCF4 to Increase Stem Cell Features of Colorectal Cancer Stem Cells and Tumorigenesis
(杂志:Gastroenterology,IF=22.682,中国医学科学院北京协和医学院)
Reducing Hypothalamic Stem Cell Senescence Protects against Aging-Associated Physiological Decline
(杂志:Cell Metabolism,IF=21.567,中南大学湘雅医院)
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