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无缝克隆试剂盒

无缝克隆技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法,可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA的片断的插入,而不需要任何限制性内切酶和连接酶。突破传统的双酶切再加上连接,只需要一步重组法,即可得到高效率克隆的重组载体,大大提高了工作效率。

汉恒生物研发的HB-infusionTM无缝克隆试剂盒操作极其简单,仅需在载体的克隆位点进行线性化,并在插入片段 PCR 引物的 5’端引入与载体克隆位点两端完全一致的 15~25 bp 同源序列。将上述线性化的克隆载体和带有同源序列的 PCR 片段按合适比例混合,并加入 HB-infusionTM Master mix,通过反应体系中 DNA外切酶、DNA聚合酶以及连接酶的在 50℃反应 20 min 即可快速完成定向克隆,阳性率几近 100%。

无缝克隆特点:
操作简单且快速
可以不需要任何限制性内切酶、连接酶,也不需要磷酸化、末端补平等操作;体系反应时间,仅需20min
应用广泛
可同时连接多个DNA片段,最多可达10个
精确高效
不附加任何多余序列,精确定向连接,阳性率高
无缝克隆原理:

在基因克隆的引物设计及目的DNA片段的扩增阶段,与常规PCR法是相同的。唯一的差异在于载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基,由此得到的PCR产物两端便分别带上了15-20个与载体序列同源性的碱基。

无缝克隆技术原理

HB-infusionTM无缝克隆原理示意图

无缝克隆与传统克隆对比:
无缝克隆传统克隆
只需要一次反应即可完成定向克隆,省略酶切、酶连等过程PCR引物设计需引入载体上的酶切位点,
PCR产物再经过酶切、胶回收、连接后定向克隆到目的载体上;
或进行TA载体连接
对酶切位点无要求,可以把目的片段插入到任意载体的任意位点 需要查找合适的酶切位点,购买各种内切酶
连接片段之间不会引入任何其他序列阳性率低
可以同时克隆多个片段多个片段,通常只能分多次拼接
HB-infusionTM产品包装:
货号产品组成使用次数体积
HB-infusion-20T
2 x HB-infusionTM Master mix20 tests200uL
Positive linearized pUC vector (250 ng) 5 tsets
25uL
Positive control insert (500 ng)5 tsets
25uL
储存条件-20℃
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