实验室安全指南-拒绝成为实验耗材！

作为“科研民工”，怎么少的了跟试剂打交道？实验室不乏有一些有毒有害的化学试剂，如操作不当就会影响人身安全。今天，小恒给大家盘点了各类生物实验常见的有毒试剂及防护措施，争做自己实验安全的第一责任人。

一、细胞培养类

二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，简称DMSO）

用途及危害：DMSO是一种含硫有机化合物，分子式为(CH3)2SO，常温下为无色无臭的透明液体，是一种吸湿性的可燃液体。具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物，被誉为"万能溶剂"，其用途广泛。由于其能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，常用于细胞冻存。DMSO存在严重的毒性作用，它会与蛋白质疏水基团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。

防护措施：使用时要避免其挥发，可准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后可用大量的清水冲洗以及稀氨水洗涤。

聚乙二醇(Polyethylene glycol，PEG)

用途及危害：常用于细胞融合，吸入、摄入、皮肤吸收等均可造成损伤。

防护措施：必须佩戴适当的个人防护装备，包括实验室外套、手套和护目镜，以减少皮肤接触和吸入风险。

紫外光或紫外线

用途及危害：实现杀菌消毒，以及观察DNA。在实验室里常用的紫外光源包括手提式紫外灯和紫外透射仪。紫外光或紫外线可损伤眼视网膜。只有通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才可观察。紫外线会引发诱变和致癌。

防护措施：切勿用裸眼观察没有防护装置的紫外光源。在紫外光下操作时要佩戴合适的预防性手套。

二、核酸提取及核酸凝胶电泳

Trizol

用途及危害：Trizol是一种用于核酸提取的试剂，包括RNA和DNA。虽然它不是直接的致癌物质，但Trizol试剂含有毒物质苯酚，若皮肤不慎接触Trizol，应立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，应咨询并听取医生意见。

防护措施：在使用时应遵循安全操作程序，以减少化学品的接触和吸入。确保在通风橱中进行操作。

苯酚(Phenol，C6H6O）

用途及危害：主要用于裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。高毒类，可经呼吸道、皮肤和消化道吸收；中毒后会导致头痛、头昏、恶心、虚脱、呼吸困难、失去知觉乃至死亡。

防护措施：如不慎触及眼和皮肤，立即用大量水冲洗，并请医生治疗。

三氯乙酸(Trichloroacetic acid，TCA）

用途及危害：大分子的沉淀剂，可用于蛋白质样品的浓缩或除盐，有轻微的特殊刺激性气味。有强腐蚀性。TCA还可以有效地破坏细胞膜和核膜，并纯化DNA，使其适合于后续的分子生物学实验，如PCR、限制性酶切和测序等。摄入和吸入均会中毒，对皮肤和组织有强刺激性，腐蚀性极强。

防护措施：操作人员须穿戴防护用具，防止与人体接触。如不慎触及眼和皮肤，立即用大量水冲洗，并请医生治疗。

焦炭酸二乙酯(Diethy pyrocarbonate，简称DEPC)

用途及危害：DEPC用于溶解RNA，可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂，是一种潜在的致癌物质。DEPC能与胺和巯基反应，因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。

防护措施：在通风橱中进行操作，并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强，但吸入后毒性是最强的，使用时必须戴口罩。不小心沾到手上注意立即用大量水冲洗。

溴化乙锭(Ethidium Bromide，简称EB)

用途及危害：常用于琼脂糖凝胶电泳中核酸染色的荧光染料，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。但是EB是强诱变剂，具有高致癌性，会在60-70摄氏度时蒸发。因此在使用它时需要极其小心，并采取适当的安全措施，以降低暴露风险。

防护措施：在处理EB时，必须佩戴适当的个人防护装备，包括实验室外套、手套和护目镜，以减少皮肤接触和吸入风险。由于溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，避免污染环境和危害人体健康。

溴酚蓝

用途及危害：1%的溴酚蓝常用于电泳指示染料。皮肤吸收可造成损伤。

防护措施：配制时在通风橱中操作，佩戴适当的个人防护装备，包括戴好手套和护目镜。

三、蛋白提取及蛋白电泳、染色

二硫苏糖醇(Dithiothreitol，简称DTT)

用途及危害：DTT是一种小分子还原剂，常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。会散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。

防护措施：当使用固体或高浓度储存液时，应戴手套和护目镜，在通风橱中操作。

考马斯亮蓝

用途及危害：一定范围内与蛋白质浓度成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

防护措施：在使用时应遵循安全操作程序，以减少化学品的接触和吸入。佩戴适当的个人防护装备，包括戴好手套和护目镜。

丙烯酰胺(Acrylamide)

用途及危害：丙烯酰胺是一种白色晶体化学物质，是生产聚丙烯酰胺的原料。丙烯酰胺属中等毒性物质，可通过皮肤吸收或呼吸道进入人体。丙烯酰胺的危害主要是引起神经毒性，同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化，试验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物，累积毒性，不容易排毒。

防护措施：在操作过程中，避免吸入未聚合的丙烯酰胺蒸汽。佩戴适当的个人防护装备，包括呼吸面具和手套，以减少暴露风险。确保在通风良好的实验室中操作。

四甲基乙二胺(N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine，简称TEMED)

用途及危害：TEMED是一种无色透明的液体，有微腥臭味，是强神经毒剂，可引起呼吸道刺激和神经系统损伤。在分子生物学中，可以用于配制SDS-PAGE胶：催化APS产生自由基，从而加速聚丙烯酰胺凝胶的聚合，作为一种促凝剂使用。

防护措施：使用时要避免其挥发，可准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后可用大量的清水冲洗以及稀氨水洗防护措施：避免直接接触皮肤和眼睛，佩戴合适的手套和安全护目镜。此外，应小心处理TEMED，以减少挥发性暴露。防止误吸，快速操作，密封存放。

十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate，简称SDS)

用途及危害：SDS属于阴离子表面活性剂，具有很强的破坏力，基本可以使所有的蛋白溶解，并破坏其天然构象结构。SDS与蛋白分子以1.4:1的比例进行结合，可以有效的覆盖蛋白本身所带的电荷情况。SDS有毒，是一种刺激物，可对眼睛造成严重损伤的危险。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害身体健康。

防护措施：配戴合适的手套和安全护目镜。在化学通风橱里操作，避免吸入其粉末。

过硫酸铵(Ammonium persulphate，简称APS)

用途及危害：在WB制胶中用于产生自由基，自由基引发丙烯酰胺聚合；APS对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性，吸入可致命。

防护措施：操作时应配戴合适的手套、安全护目镜和防护服。始终在通风橱里操作，操作完后及时清洗双手。

苯甲基磺酰(Phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF)

用途及危害：PMSF是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂，可抑制多种蛋白酶活性，为防止蛋白降解，提高得率，一般在提蛋白时加入。但是它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有很大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受到致命伤害。

防护措施：戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱里使用。与人体接触后， 要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤，并将已污染的工作服丢弃。

叠氮钠(Sodium azide，NaN3）

用途及危害：叠氮钠毒性非常大，它能够阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。它可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害身体健康。

防护措施：配戴合适的手套和安全护目镜，操作时要格外小心。

硝酸银(silver nitrate，AgNO3)

用途及危害：用于对电泳后的蛋白染色（银染色法）；硝酸银是强氧化剂，具有腐蚀性（接触到皮肤会出现黑色斑点）和污染性，可造成皮肤和眼灼伤。误服硝酸银可引起剧烈腹痛、呕吐、血便，甚至发生胃肠道穿孔。成年人致死量约10克左右。半数致死量(小鼠，经口)50mg/kg；与酒精接触会产生爆炸。

防护措施：避免吸入，配戴合适的手套和安全护目镜，在通风橱中操作，远离热源、火花和明火。如不慎触及眼和皮肤，立即用大量水冲洗，并请医生治疗。

冰乙酸(Aceticacid，CH3COOH)

用途及危害：在银染中与乙醇配成蛋白固定液；冰乙酸具有强腐蚀性，易燃液体，吸入对鼻、喉和呼吸道有刺激性。对眼有强烈刺激作用。皮肤接触，轻者出现红斑，重者引起化学灼伤。误服浓乙酸，口腔和消化道可产生糜烂，重者可因休克而致死。易燃，其蒸气与空气混合，能形成爆炸性混合物。

防护措施：避免吸入，配戴合适的手套和安全护目镜，在通风橱中操作，远离热源、火花和明火。如不慎触及眼和皮肤，立即用大量水冲洗，并请医生治疗。

四、病理染色

二甲苯

用途及危害：可燃，高浓度具有麻醉作用。吸入、摄入、皮肤吸收可造成伤害。

防护措施：避免吸入，配戴合适的手套和安全护目镜，在通风橱中操作，远离热源、火花和明火。

多聚甲醛(Paraformaldehyde，POM)

用途及危害：用于组织固定，易挥发剧毒。易通过皮肤吸收，并对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有严重破坏性。

防护措施：避免吸入，配戴合适的手套和安全护目镜，在通风橱中操作。

甲醛(Formaldehyde，HCHO)

用途及危害：甲醛具有防腐杀菌性能，可用来浸制生物标本，给种子消毒等。甲醛有很大的毒性并易挥发，也是一种致癌剂。很容易通过皮肤吸收，对眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。

防护措施：避免吸入其挥发的汽雾。要戴合适的手套和安全眼镜。始终在化学通风橱内进行操作。远离热源、火花及明火。

氯仿(Trichloromethane，CHCl3)

用途及危害：氯仿可以用作萃取剂，用于分离和提取生物样品中的有机物；还可以用作抑制剂，用于抑制生物反应中的某些酶的活性。氯仿是一种挥发性有机溶剂，长期或高浓度暴露可能对健康产生危害。它对中枢神经系统具有毒性。氯仿对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一种致癌剂，可损害肝和肾。易挥发，氯仿应避免吸入挥发气体。

防护措施：使用时，需要采取适当的安全措施，配戴合适的手套和安全护目镜，在通风橱中操作。

Triton X-100

用途及危害：Triton X-100是一种比较温和的去垢剂，常作为添加剂使蛋白保持稳定，尤其是膜蛋白。可以提高真核细胞细胞膜的通透性。引起严重的眼睛刺激和灼伤。吸入、摄入，皮肤可造成伤害。

防护措施：需要采取适当的安全措施，配戴合适的手套和安全护目镜，在通风橱中操作。

吉姆萨(Giemsa)

用途及危害：Giemsa染液适于血液涂抹标本、血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等的染色。Giemsa染液是有毒的，被人体吸入可引起双目失明甚至死亡。

防护措施：配戴合适的手套和安全护目镜。在化学通风橱里操作，避免吸入其粉末。

同位素

用途及危害：同位素标记法也叫同位素示踪法；可用于追踪物质的运行和变化规律。同位素可分为稳定同位素和放射性同位素。稳定同位素不发生衰变，没有放射性，不会对身体健康造成不良影响；放射性同位素具有一定的半衰期，是不稳定的同位素，具有放射性，对人体是有害的。

防护措施：采取必要的放射性防护措施和安全措施，尽量避免高温、高压等剧烈反应。

除了上面介绍的这些化学试剂之外，在日常科研工作中与微生物的接触也难以避免，在利用这些微生物进行实验研究的时候，需要按照相关规定进行操作，以保证实验人员与环境的安全。

实验室常见微生物

(1)大肠埃希菌

俗称大肠杆菌，可以成为条件致病菌，比如有异物的存在(如导尿管)、宿主损伤或正常无菌部位的破损引起了粪便或高浓度混合菌的侵入，可引起肠外感染。某些特殊菌种能导致腹泻。微生物检验接种培养过的琼脂平板应压力灭菌30min，趁热将琼脂倒弃处理。

(2)金黄色葡萄球菌

革兰氏阴性菌，是人类的一种重要病原菌，主要引起化脓性炎症，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。微生物检验接种培养过的琼脂平板应压力灭菌30min，趁热将琼脂倒弃处理。

此外，国家根据病原微生物实验室的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定，将病原微生物实验室分为一级、二级、三级、四级。其中一级生物安全实验室对生物安全隔离的要求最低，四级最高。

进入病原微生物实验室应该做好个人防护，如佩戴口罩、防护眼睛、工作服、防护服等。

另外，在进行基因功能研究的时候，为了实现基因高效的表达调控，还会经常用到一类表达工具——医用假病毒，医用假病毒是通过野生病毒改造而来，祛除了野生病毒的致病元件，以保证其安全性，并将其基因组进行了拆分，保留其感染细胞的能力。实验室中最常用的医用假病毒工具有慢病毒、腺病毒和腺相关病毒，这些工具病毒在使用时也应严格按照相关标准。

慢病毒(Lentivirus)

慢病毒载体是一种单链RNA病毒，是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因治疗载体，能够感染分裂细胞和非分裂细胞。实验室常用的慢病毒载体是经过人工改造的，将遗传物质中含有外壳蛋白的所有基因都剔除了，从而保证了外源基因整合到基因组上时不会带有表达病毒外壳所需的元件。理论上对人体无害，但是病毒仍然具有潜在的生物学危险，我们建议慢病毒相关实验操作应在生物安全柜(BL-2级别)内进行操作。

建议大家使用慢病毒进行实验时严格参照以下标准操作：

1) 操作病毒时穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及双手臂的皮肤；

2) 操作病毒时小心病毒溅出，如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液请用84消毒液浸泡后统一处理。

3) 如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。

4) 病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌后处理。

5) 实验完毕用肥皂清洗双手。

腺病毒(Adenovirus)

腺病毒载体时无包膜的线性双链DNA病毒，能够感染分化和未分化的细胞而不会整合进宿主基因组。第1代腺病毒载体删除了病毒复制必需的E1区和/或E3区，因此需要转化可组成型表达E1区蛋白的293细胞。此外，由于感染后通常只会引起轻度的疾病，腺病毒被认为是一种安全的病毒载体，在基因治疗、溶瘤病毒和病载体毒疫苗中得到广泛应用。考虑到病毒仍然具有潜在的生物学危险，建议大家使用腺病毒进行实验时严格参照以下标准操作：

1) 操作病毒时穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及双手臂的皮肤；

2) 操作病毒时小心病毒溅出，如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液请用84消毒液浸泡后统一处理。

3) 如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。

4) 病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌后处理。

5) 实验完毕用肥皂清洗双手。

腺相关病毒(adeno-associated virus)

腺相关病毒是目前发现结构最简单的、无包膜的单链DNA病毒。AAV自身不能复制，必须依赖于其它病毒复制。重组腺相关病毒是经工程改造的AAV载体，它剔除了AAV基因组全部编码蛋白Rep或Cap基因序列，只在两端保留作为包装信号的反式DNA序列（即ITR），rAAV与慢病毒/逆转录病毒相比，rAAV感染细胞后不会与宿主基因组整合重组，从而避免产生癌症的风险。有超过80%的人携带AAV，未发现与任何疾病相关，具有极低免疫原性。

另外，根据美国国立卫生研究院生物安全活动机构关于生物安全管理规定，用于基因治疗的DNA和基因载体，根据它们对健康成人相对致病性被分成四个风险类（RiskGrades）。

腺相关病毒(AAV)1-4型、复制缺陷型重组AAV（感染机体既不编码潜在的癌基因，也不产生毒素分子），是目前唯一一种属于RG1类的病毒载体。而其他常用的腺病毒、慢病毒、疱疹病毒、痘病毒均属于RG2类，逆转录病毒属于RG3类。

最后，小恒再次提醒大家：科研路漫漫其修远兮，吾将安全第一而求索！